筛选含有目的基因的受体细胞时怎么排除质粒与质粒连接的干扰?(如何筛选出空质粒)

5058℃ 崔恒林

举例说明如何筛选出含有目的基因的受体细胞

1.如果是抗性基因之类的可以直接用选择培养基2.可以分出离缺陷型为靶细胞,并在质粒上串联该抗性基因(如氨苄青霉素, 卡拉霉素等)这样只有转化子才能在选择培养基上长出.3. 在质粒上串联有标志性产物的基因,用涂布法获得转化子的单菌落进行培养EG:现在使用的许多载体(如PUC系列)有含有一个大肠杆菌DNA的短区段,其中含有β-半乳糖苷酸基因(lacZ)的调控序列和头146个氨基酸偏码区.当外源基因插入时,有β-半乳糖苷酶表达, 在生色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(x-gal)培养基中形成兰色菌落.

(如何筛选出空质粒)筛选含有目的基因的受体细胞时怎么排除质粒与质粒连接的干扰?

目的基因导入受体细胞是怎样进行的?如何防止目的基因与质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接?请

目的基因导入可以制备感受态细胞,具体操作可以百度或者看教科书,基本过程就是先低温处理再短暂高温.第二个问题可以通过使用稀有的限制性内切酶切出特异性的黏性末端,可以准确的结合,悬赏分的问题你可以在页面上找一找,有个下拉菜单可以选择的

如何筛选出含有目的基因的受体细胞,举

利用基因表达载体上的标记基因筛选:例如:标记基因是四环素抗性基因,就用含有四环素的培养基培养活细胞,如果细胞活着,证明基因表达载体已经进入.不存活,表明没有进入受体细胞.

关于含目的基因受体的筛选的问题

这其中有个抗原筛选的过程,目的基因能够表达一种特定的蛋白质,在培养基中加入这种蛋白质的抗体,产生颜色反应,就能识别出来,没有目的基因的质粒是不会产生反应的

带有目的基因的质粒怎样导入受体细胞

1.先加到运载体上:质粒、动植物病毒等 再导入受体细胞:显微注射、病毒侵染等方法 2.目的基因导入受体细胞,需要运输工具即运载体,如大肠杆菌的质粒.用一种限制性内切酶切断目的基因和质粒使它们产生相同的粘性末端,在切口加入dna连结酶后,质粒的粘性末端就会与目的基因的粘性末端碱基互补配对结合,行成重组dna分子,把它导入受体细胞如细菌、酵母菌,目的基因就能随受体细胞的繁殖而复制

基因工程中,如果目的基因没有进入受体细胞,但是质粒带着标记基因进入了如何处理

目的基因要构入载体质粒才能转入受体细胞,需要检测载体是否已经与目的基因连接再转入受体细胞.

怎么通过标记基因挑选含有目的基因的质粒质粒中本来

重组质粒上面除了目的基因,还有抗性基因,放入选择培养基里就可以筛选出抗性质粒,表明重组成功,但是没有插入目的基因的质粒也可以有抗性

标记基因怎么筛选有目的基因的质粒

在基因工程中所用的质粒上的标记基因不只一个,人们在加上目的基因时,一般是保留一个标记基因,破坏一个标记基因的方法,这样如果导入的是有目的基因的质粒和不含标记基因的质粒,后代就有办法筛选了.

如何筛选出空质粒和含有目的基因的质粒

一般做菌落PCR也可以做酶切鉴定终极做测序

如果导入的是质粒而非重组质粒,那么受体细胞中都含有标记基因,那怎样筛选出带目的基因的细胞

这个就要看标志基因是在细菌质粒上,还是在目的基因上了.可能不同的教材,是从不同的角度出发的.