为什么荧光素酶报告基因活性太低

为什么荧光素酶报告基因活性太低 (1) 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点.(2)设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中.(3)筛选阳性克隆,测序.扩增克隆并提纯质粒备用.(4) 扩增转录因子质粒,提纯备用.同时准备相应的空载质粒对照,提纯备用.(5) 培养293(或其它目的细胞),并接种于24孔板中,生长10-24小时(80%汇合度).(6) 将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞.(7)提取蛋白并用于荧光素酶检测.(8) 加入底物,测定荧光素酶的活性.(9) 计算相对荧光强度,并与空载对照比较.

双荧光素酶试验是化学发光还是生物发光

生物发光,是生物素酶

通过实验找出发光的最佳条件,并说明影响化学发光的因素有哪些

通过实验找出发光的最佳条件,并说明影响化学发光的因素有哪些化学发光免疫分析包含两个部分,即免疫反应系统和化学发光分析系统.化学发光分析系统是利用化学发.

紧急求助,关于双荧光素酶报告基因实验中细胞裂解问题

1.两者的结果检测方法不同.GFP绿色荧光蛋白,很直观,能够直接检到荧光,在普通的细胞培养条件下都能够观察到,对细胞的生命活动和其他并行的实验安排影响很小..

为什么我测的3'utr 突变载体的荧光素酶比值高于1

目的针对促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liver-1,PRL-1)3'端非翻译区(3-untranslatedregion,3'UTR)构建PRL-1荧光素酶报告基因载体及突变体,为.

双荧光素酶报告基因测出来荧光值是多少

成像的话一般荧光显微镜、激光共聚焦显微镜;定量的话一般就是流式细胞仪吧.

在荧光素酶中加入正确的荧光素底物就可以发光.荧光素酶及合成基因

荧光素也就是fda fda可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内.由于荧光素较bcecf或calcein的亲水性低,因此荧光素从细胞中渗漏的量也高.fda也可用于流式细胞仪..

荧光素酶的分析

荧光素是具有光致荧光特性的染料,荧光染料种类很多.目前常用于标记抗体的荧光素有以下几种:异硫氰酸荧光素,四乙基罗丹明,四甲基异硫氰酸罗丹明,酶作用后产.

双荧光素酶报告基因和荧光素酶报告基因一样吗

双荧光素酶报告基因载体 报告基因检测被广泛应用于研究基因表达及外部刺激下原核和真核细胞的反应.luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火.

某研究性学习小组利用荧光素 - 荧光素酶生物发光法,测定人参愈伤组

A、据图示横坐标可知,该实验的自变量是荧光素酶溶液的浓度,A正确;B、由图可知该实验共设置了7组不同浓度的荧光素酶溶液,B错误;C、实验涉及的浓度中,e点所对应的荧光素酶浓度时,ATP已经全部水解,即使继续增加酶浓度,由于受ATP数量限制,发光强度也不再增加,因此e点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度,C正确;D、图中e、f、g点所对应的荧光素酶浓度不同,但发光强度相同,表明达到e点所对应的荧光素酶浓度时,ATP已经全部水解,D正确.故选:B.