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优点:是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多;重复性好.颜色深,析光度.缺点:是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多.近年来folin-酚法逐渐被考马斯亮兰.

其基本原理应该很清楚了,所以在此就不作说明.需要注意的是,用此方法测蛋白质时,还原反应发生在PH10的溶液中,而Folin试剂在碱性条件下不稳定,所以将Folin试.

Folin酚法最好,准确度最高; 双缩脲法最差,准确度最低;现很少用; 考马斯亮蓝G250法介于两者之间.

Folin-酚试剂法(Lowry法):以最早期的双缩脲法为基础,并有所改进.蛋白质与Cu2 反应,产生蓝色的反应物.但是与双缩脲法相比,Lowry 法敏感性更高.缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂;.

大概与样品中的干扰物质有关. 干扰Folin酚法的物质有:酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等. 干扰考马斯法的:主要是去污剂,如 Triton X-100.

①凯氏定氮法 原理:蛋白质平均含氮量为16%.当样品与浓硫酸共热,蛋白氮转化为铵盐,在强碱性条件下将氨蒸出,用加有指示剂的硼酸吸收,最后用标准酸滴定硼酸,通过标准酸的用量即可求出蛋白质中的含氮量和蛋白质. ③Folin酚法(Lowry) Folin酚法是biuret 法的延伸,所用试剂由试剂甲和乙两部分组成.试剂甲相当于双缩脲试剂(碱性铜试剂),试剂乙中含有磷钼酸和磷钨酸. 在碱性条件下,蛋白质中的巯基和酚基等可将Cu2+还原成Cu.

Folin—酚试剂法最早是由Lowry确定的测定蛋白质浓度的基本方法.以后在生物化学领域得到广泛的应用.此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度. Folin—酚试剂由甲试剂和乙试剂组成.甲试剂由碳酸钠,氢氧化钠,硫酸铜及酒石酸钾钠组成.蛋白质中的肽键在碱性条件下,与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用,生成紫红色络合物.乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、.

认为是,福林酚试剂的显色反应,就是由酪氨酸、还有色氨酸、半胱氨酸引起的;测定酶的水解活性,当酪氨酸含量越多,即颜色越深

福林-酚法是双缩脲法的发展,包括两步反应: (1)在碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物. (2)此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸(FolIn试剂)还原,混合物深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物),颜色深浅与蛋白质含量成正比. 此方法操作简便,灵敏度比双缩脲法高100倍,定量范围为5~100μg蛋白质.FolIn试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸引起,因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物,均有干扰作用.此方法的缺点是有.

讨论主要目的就是验证实验原理的可行性和实验目的的正确性. 主要就是写下Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起,因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用.此外,不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同等这个原理

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