为了赋予工业酿酒酵母对淀粉和纤维素的降解活性,提高酿酒酵母对粗木薯粉进行酒精发酵时的酒精产率;另一方面,为了解决工业酿酒酵母不适于使用营养缺陷型筛选标记对转化.
标记基因是用来标示是否表达的基因.抗性基因是产生相应抗性的基因.标记基因具体如何筛选要根据其标记的方式.抗性基因可以作为标记基因,利用有无“抗性”的特征作为“标记”.另外可用的标记基因是报告基因,比如荧光蛋白等,直接观察“报告信号”就可以作为“标记”了.
大多数质粒载体都是用抗菌素抗性标记,包括氨苄青霉素抗性(Ampr)、卡那霉素抗性(Kanr)、四环素抗性(Tetr)、链霉素抗性(Strr)和氯霉素抗性(Cmlr))等. .
抗性标记筛选原理
楼上所说的蓝白斑筛选属于另一种方法.详解如下:有一些质粒载体带有两个或两个以上的抗生素抗性基因.当外源DNA插入其中一个抗性基因序列内部时,由于基因编码.
如果在一个载体上有抗性基因,那么这个抗性基因就是标记基因,有助于筛选含重组dna的细胞. 举个例子,如果在载体上有抗青霉素的基因,那么,如果将目的基因加到这个载体上导入受体细胞后,那么,这个受体细胞就能在含有青霉素的培养基上生长
这就是抗生素抗性突变的通俗解释大部分细菌在使用抗生素后都会死亡,使用抗生素后相当于对这些细菌进行了人工筛选,只有含抗生素抗性基因的细菌存活下来并继续繁衍.但有些细菌受外界刺激产生基因突变,这些突变性状中正好有能抗击抗生素的,所以之后的细菌均对抗生素免疫,在这之后繁衍出的保留了抗性性状,并衍生出多种突变性状
载体抗药性标记筛选
如果在一个载体上有抗性基因,那么这个抗性基因就是标记基因,有助于筛选含重组dna的细胞. 举个例子,如果在载体上有抗青霉素的基因,那么,如果将目的基因加到这个载体上导入受体细胞后,那么,这个受体细胞就能在含有青霉素的培养基上生长
对的 你说的对.抗生素标记基因若被破坏,其抗性产物不能表达 抗性不复存在.因此就不能按照抗生筛选了.但一般构建成功的质粒 你导入目的基因都将是被插入多克隆位点的,不会破坏抗性基因.因此可依赖抗性筛选.万一你的实验设计很特别, 那只好采用影印平板法进行反向筛选:采用具有抗性质粒的菌株作为出发菌株进行重组,先将重组菌株培养在无抗性平板上,等长出菌落以后,影印于另一个加抗生素的平板上培养,对比2个平板,查看无抗平板上的、没有抗性的菌落.同法反复筛选 则可.
不一样,合成基因控制合成这种抗生素,如合成青霉素,抗性基因使产生对这种抗生素的抵抗力,使细胞不被这种抗生素杀死.满意就采纳吧!
表达载体图谱
如图中箭头所指,如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断,则会有这样一些可能:a b c d b+c+d a+b c+d a+b+c d b+c 故选
需要极详细地解释【 】这一空!为什么只要填一种啊!!
(1)用EcoRI酶切出的目的基因和质粒具有相同的黏性末端,如果放在一起加入DNA连接酶,则可出现3种连接结果,即目的基因自身连接形成的连接物,载体自身连接形成.
克隆载体图谱
一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori,即控制复制起始的位点.原核生物. 这是用来区别克隆载体与表达载体.克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成.
个人认为,看质粒图谱,1,该质粒的用途:筛选,扩增,表达,还是报告?用一种低拷贝数的质粒来扩增目的片段显然不如高拷贝的质粒效率高;2,质粒的宿主:原核质粒?酵母质粒?真核细胞质粒?3,使用有无特殊要求:抗性,营养缺陷?4,关键是研究:多克隆位点,上下游的限制酶位点是否合适,对于你要插入的目的片段,是否有高效、经济的酶切位点;启动子是什么诱导机制?起始密码子和终止子的位置?如果插入你的目的片段,是否会移码或提前终止?5,如果你选用的是比较冷僻的限制酶,在多克隆位点外是否有该酶的酶切位点;6. 标签蛋白序列或报告基因序列在插入片段的上游还是下游?对后续实验有无影响?祝好!
你看质粒图谱上是不是有个pUC origin这个就是在E.coli中高拷贝的复制起点
原核抗性和真核抗性
区别:真核细胞较大 本质区别有无真正细胞核.原核真核的细胞壁成分不一样 细胞质一般不做比较 细胞核就是他的本质区别 DNA呢都是他们的遗传物质.真核细胞指含有真核(被核膜包围的核)的细胞.其染色体数在一个以上,能进行有丝分裂.还能进行原生质流动和变形运动.而光合作用和氧化磷酸化作用则分别由叶绿体和线粒体进行.除细菌和蓝藻植物的细胞以外,所有的动物细胞以及植物细胞都属于真核细胞.由真核细胞构成的生物称为真核生物.原核细胞是组成原核生物的细胞.这类细胞主要特征是没有以核膜为界的细胞核, 也没有核仁, 只有拟核,进化地位较低.
主要是因为原核和真核表达系统所需的表达元件不同.比如说启动子,终止子在两种表达系统中是不一样的.带有真核表达元件的是真核载体,能在真核生物内表达;带有原核表达元件的是原核载体,能在原核生物内表达.两者都具有的为穿梭载体.1)真核表达载体和原核表达载体就是能在真核生物或原核生物中表达的载体,它们一般都带有能在真核生物或原核生物中表达的必需表达元件;2)真核表达和原核表达的目的都是为了能够大量获得自己所需要的目的基因的表达产物,最好有生物活性,以便下一步的实验需要.3)原核表达载体一般只能在原核生物中表达外源基因,但有些穿梭载体可以分别在真核和原核生物中表达它们的表达元件.
真核生物dna复制需要起始原点识别复合物(orc)参与,还有就是真核的每条染色质上可以有多处复制起始点,而原核只有一个起始点;真核的染色体在全部完成复制之前,各个起始点上dna的复制不再开始,而快速生长的原核生物中,复制起始点上可以连续开始新的dna复制,表现为虽然只有一个复制单元,但可有多个复制叉;真核复制叉移动速度慢;真核dna聚合酶一般不具有核酸外切酶活性,而原核则有…就知道这么多了,望采纳…