降落PCR程序如何设计
一般退火温度为从tm+5度降落至tm-10度，每度2个cycle，最后在tm-10度上增加5-10个cycle.例：tm为58度，则从63度降落到48度，每度2个cycles,最后在48度加5-10个cycles。如果效果不好，可以再微调。
帮忙讲解一下降落PCR（touchdown PCR）的原理
降落PCR（touchdown PCR）的原理:DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在DNA聚合酶与启动子的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，并设计引物做启动子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
你到这里看一下,说得很详细的: http://baike.baidu/view/2764.htm
bioer xp pcr仪怎么设置梯度pcr
不同的梯度PCR仪不一样的。
一般别的的步骤和普通PCR都一样，不同在于复性温度的设置，多数是先设定一个复性温度的范围，然后是该范围内的梯度数，（有的还有0.5和0.2微升EP管之分），PCR仪会很据这两个数据给出每个梯度数的具体温度，然后你根据这些温度选择接近你所希望的复性温度较接近的温度所在的孔的位置，将ep管插入这些孔即可。
Bio-RAD PTC-200 PCR仪如何具体设置梯度pcr
编写程序：
temp 设置温度和时间
ramp 调整变温速率
go to 设定循环的步骤
Gradient 设置梯度温度
在Step 3 中选择Gradient，下一个界面中Lower temp 输入你所设梯度的下限温度，Upper temp输入你所设梯度的上限温度，再输入时间
注意：你输入上限和下限温度后，仪器会自动平分为8个梯度温度。