柱层析原理及影响因素
柱层析总的原理，就是让目标蛋白结合在层析填料（树脂）上，然后通过特定的缓冲液将其洗脱下来，以达到纯化的效果。具体几种分类稍微归纳了下给你参考
免疫亲和层析
原理：亲和色谱分离蛋白以一个蛋白与特异性配基配对到色谱基质上，且蛋白质与配基间具有可逆的相互作用作为基础。目标蛋白与配基之间的生物学相互作用，可以是由于静电学的相互作用或是分子间疏水的相互作用，也可以是范德华力或氢键结合力产生的。
影响因素：主要是亲和标签的完整程度，缓冲液的组分。
离子交换层析
原理：离子交换对分子的分离是基于它们表面净电荷的差异。以蛋白质为例，它由许多包含弱酸弱碱集团的不同氨基酸组成。它们表面的净电荷会随着周围环境的pH值改变而改变。对某一特定蛋白质来说，其表面净电荷与pH之间的相对关系是独特的，而离子交换层析正是利用了这一特点来完成对不同蛋白质的分离。
影响因素：主要是缓冲液的pH值，盐浓度。
疏水相互作用层析
原理：疏水层析根据蛋白表面疏水性的不同，利用蛋白质与疏水层析介质疏表面可逆的相互作用来分离蛋白。纯水状态下，任何疏水作用都太弱而不能导致配基与蛋白之间的相互作用。某些盐却可以增强疏水相互作用。高浓度的盐会增强相互作用，而低浓度的盐会降低相互作用。但是目前尚无被广泛接受的关于疏水相互作用层析机制的理论。
影响因素：环境温度，盐浓度。
凝胶过滤层析
凝胶过滤根据分子通过凝胶填料大小不同对其进行分离。以蛋白质为例，因为分子不与凝胶填料结合，故缓冲液成分不会直接影响分辨率。
影响因素：蛋白质分子量。
高效液相出峰有前沿峰是怎么回事？如何消除前沿峰？回答的越详细越好。
前沿峰
1柱温低
2样品溶剂使用不当－－－－－当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰。例如，在反相色谱中用已腈做样品溶剂，而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。
3柱过载－－－－－－－－超载，未被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来，形成前沿峰。
4在大峰前有小峰出－－－－－－－－假象前沿峰，即大峰前包埋了没有分开的小峰
5柱死体积
脱尾峰
1筛板堵塞－－－－指柱子两头的过滤筛板，如果堵塞，样品就会在筛板部分受阻而形成时间延迟，使得样品在柱后流出时峰型形成拖尾。
2色谱柱塌陷－－－－是指色谱柱由于其它原因引起了柱效率丧失不能对物质形成保留，使得物质不在固定相上保留而随流动相流出，但是又还有一点柱效，因此形成拖尾，即很宽的有个尾巴的色谱峰。
3柱头有污染－－－－1，2，3即样品不在同一起跑线起跑，从后面开始跑得到达终点稍晚，表现出拖尾。
4额外柱效应－－－－是否是柱后扩散？
5流动相ph错误－－－某PH下有的样品存在分子型和离子型的动态平衡，离子型的陆续向分子型转化就会表现出拖尾。调节PH值抑制分子解离可以改善拖尾。
色谱峰的前沿与拖尾问题
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内容来自用户:wll紫菀
1.产生前沿和拖尾的原因一般有哪些？产生前沿和拖尾的原因一般有哪些？产生前沿和拖尾的原因一般有哪些拖尾：1干扰峰，优化条件分离2色谱柱塌陷，更换色谱柱3流动相pH不合适，调节pH值4管路没有接好，存在较大的死体积，可以重新接一下前沿：1溶剂选择不合适，选择合适的溶剂2样品过载，降低进样量3柱温太低，升高柱温4色谱柱损坏，更换色谱柱5干扰峰，优化色谱条件分离可能的问题：1.柱子问题2.流动相不恰当3.定容样品的溶剂不合适产生峰前沿的原因：柱过载，柱头塌陷，溶剂选择不对产生峰拖尾的原因：存在杂质未分开，柱污染，柱子选择不对。拖尾峰与柱子有关，可能是过载，稀释样品再做，或换新柱做吧一般产生托尾峰往往是有机性相近杂质没有分开，可以优化分析方法，或更换柱子试一试；也可能由于柱子使用时间太久柱效下降出现塌陷等原因；再有也会根样品本身性质有关，基团需要流动相中添加能与之结合优化峰形的化学物质，要根据具体情况而定。柱子可能污染了吧，溶剂也可能有，或柱效下降。图谱前沿和拖尾的原因主要是流动相选择不合适，可以相应调整流动相的极性，或者适当加入酸来调整，可以得到较好的改善。一般来讲，酸碱在流动相中对于前沿和拖尾影响较大。柱前沿是可能因为柱超载，拖尾是可能因为样品被污染，选择合适的流动相，调节好PH能够改善这以情况。液相拖尾峰出现原因及解决办法：1.柱头有空隙。解决办法：使用填料或玻璃珠填
为什么要柱效检测？具体步骤怎么弄？要详细步骤和运算
固定柱床层析是一种多功能的分离技术，常用于生物医药的分离中。
无论是在保证纯化过程的稳定性还是保证最终产物的安全性上，填充柱的制备和质量认证都是极为重要的步骤。
即使柱效检测不能作为单一参数对后期的纯度和回收率进行预测，至少在启动纯化工艺前可作为一种快速途径对层析柱和设备性能进行检测。所以需要检测柱效。
1，系统准备
对系统和管道进行润洗准备
清除在包装、储存或运输过程中累积在管道和分流系统中的空气
将层析柱置于1.5 柱体积以上的洗脱液中进行平衡。若柱平衡在盐溶液中进行，则需要保证出口的电导和入口的电导一致。平衡时的液流方向需与测试时一致。测试方向既可向上流也可向下流。
2，运行脉冲柱效检测
将提前准备好的一定体积的样品（1%柱体积）加载于柱上，上样最好采用样品环，超级容量杯或样品泵。
3，通过测定峰宽和对称性评价
相对峰宽通常用一定数量的理论塔板（N），
一个理论塔板的等价高度（HETP）
颗粒半径 （d/P）
或更常用折合了的塔板高度（h）来进行描述：
h=HETP/d/P 对称性As
对称因子As 描述了与理想高斯峰形状的偏差，通过对10%
峰高处的峰宽进行计算得到：
As=b/a