影响分子筛层析效果的因素有那些,原因是什么?(简述分子筛吸附的原理,影响分子筛吸附效果的因素有哪些,是如何影响的)

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影响分子筛层析效果的因素有那些,原因是什么?(简述分子筛吸附的原理,影响分子筛吸附效果的因素有哪些,是如何影响的)

简述分子筛吸附的原理,影响分子筛吸附效果的因素有哪些,是如何影响的

分子筛吸附原理

吸附现象分为物理吸附和化学吸附两种。对气体纯化主要靠吸附并有交换作用。 分子筛孔隙率非常高,内表面积很大,内空穴占体积的50%左右,

经高温活化沸石失水后,晶体内部形成许多孔径大小均一的孔径,具有很强的吸附能力,能有效地把直径小于其孔径的分子吸进孔内,而把大于孔径的分子挡在孔外,从而使得大小不同的分子分离。

影响分子筛吸附容量的因素:1.温度:吸附容量随温度的升高而减少。 2.流速:流速越高吸附效果越差。 3.再生完善程度:再生解析越彻底吸附容量就越大。

4.分子筛厚度:吸附剂床层厚吸附效果越好。

影响凝胶过滤层析实验结果的因素有哪些

凝胶层析操作中应注意的一些具体问题.

(1)层析柱的选择

层析柱大小主要是根据样品量的多少以及对分辨率的要求来进行选择.一般来讲,主要是层析柱的长度对分辨率影响较大,长的层析柱分辨率要比短的高;但层析柱长度不能过长,否则会引起柱子不均一、流速过慢等实验上的一些困难.一般柱长度不超过100cm,为得到高分辨率,可以将柱子串联使用.层析柱的直径和长度比一般在1:25-1:100之间.用于分组分离的凝胶柱,如脱盐柱由于对分辨率要求较低,所以一般比较短.

(2)凝胶柱的鉴定

凝胶柱的填装情况将直接影响分离效果,关于填装的方法前面已有介绍,这里主要介绍对填装好的凝胶柱的鉴定.凝胶柱填装后用肉眼观察应均匀、无纹路、无气泡.另外通常可以采用一种有色的物质,如蓝色葡聚糖-2000、血红蛋白等上柱,观察有色区带在柱中的洗脱行为以检测凝胶柱的均匀程度.如果色带狭窄、平整、均匀下降,则表明柱中的凝胶填装情况较好,可以使用;如果色带弥散、歪曲,则需重新装柱.另外值得一提的是,有时为了防止新凝胶柱对样品的吸附,可以用一些物质预先过柱,以消除吸附.

(3)洗脱液的选择

由于凝胶层析的分离原理是分子筛作用,它不象其它层析分离方式主要依赖于溶剂强度和选择性的改变来进行分离,在凝胶层析中流动相只是起运载工具的作用,一般不依赖于流动相性质和组成的改变来提高分辨率,改变洗脱液的主要目的是为了消除组分与固定相的吸附等相互作用,所以和其它层析方法相比,凝胶层析洗脱液的选择不那么严格.由于凝胶层析的分离机理简单以及凝胶稳定工作的pH 范围较广,所以洗脱液的选择主要取决于待分离样品,一般来说只要能溶解被洗脱物质并不使其变性的缓冲液都可以用于凝胶层析.为了防止凝胶可能有吸附作用,一般洗脱液都含有一定浓度的盐.

(4)加样量

关于加样前面已经有所介绍,要尽量快速、均匀.另外加样量对实验结果也可能造成较大的影响,加样过多,会造成洗脱峰的重叠,影响分离效果;加样过少,提纯后各组分量少、浓度较低,实验效率低.加样量的多少要根据具体的实验要求而定:凝胶柱较大,当然加样量就可以较大;样品中各组分分子量差异较大,加样量也可以较大;一般分级分离时加样体积约为凝胶柱床体积的1%-5%左右,而分组分离时加样体积可以较大,一般约为凝胶柱床体积的10%-25%.如果有条件可以首先以较小的加样量先进行一次分析,根据洗脱峰的情况来选择合适的加样量.设要分离的两个组分的洗脱体积分别为Ve1和Ve2,那么加样量不能超过(Ve1-Ve2).实际由于样品扩散,所以加样量应小于这个值.

从洗脱峰上看,如果所要的各个组分的洗脱峰分得很开,为了提高效率,可以适当增加加样量;如果各个组分的洗脱峰只是刚好分开或没有完全分开,则不能再加大加样量,甚至要减小加样量.另外加样前要注意,样品中的不溶物必须在上样前去掉,以免污染凝胶柱.样品的粘度不能过大,否则会影响分离效果.

(5)洗脱速度

洗脱速度也会影响凝胶层析的分离效果,一般洗脱速度要恒定而且合适.保持洗脱速度恒定通常有两种方法,一种是使用恒流泵,另一种是恒压重力洗脱.洗脱速度取决于很多因素,包括柱长、凝胶种类、颗粒大小等,一般来讲,洗脱速度慢一些样品可以与凝胶基质充分平衡,分离效果好.但洗脱速度过慢会造成样品扩散加剧、区带变宽,反而会降低分辨率,而且实验时间会大大延长;所以实验中应根据实际情况来选择合适的洗脱速度,可以通过进行预备实验来选择洗脱速度.一般凝胶的流速是2-10 cm/hr,市售的凝胶一般会提供一个建议流速,可供参考.总之,凝胶层析的各种条件,包括凝胶类型、层析柱大小、洗脱液、上样量、洗脱速度等等,都要根据具体的实验要求来选择.例如样品中各个组分差异较小,则实验要求凝胶层析要有较高的分辨率,提高分辨率的选择应主要包括:选择包括各个待分离组分但分离范围尽量小一些的凝胶,选择颗粒小的凝胶,选择分辨率高的凝胶类型,选择较长、直径较大的层析柱、减少加样量、降低洗脱速度等等.

影响到硅胶柱色谱分离效果的因素包括

影响气相色谱分离度的因素有:

1、色谱柱的固定相,也就是色谱柱的型号;

2、色谱柱的规格,也就是色谱柱的柱长、内径、固定液的液膜厚度等因素;

3、载气的种类;

4、载气的流速,不同流速柱效都不一样;

5、柱温;

6、进样室的结构;

7、检测器的结构。gel filtration chromatography,又称水系凝胶色谱, 是以水或缓冲溶液作流动相的凝胶色谱;

主要原理是根据分子大小进行筛选分离,从而使样品中分子大的先流出色谱柱,中等分子的后流出,分子最小的最后流出,这种现象叫分子筛效应;

根据凝胶的分子直径大小, 和分离化合物的分子直径大小, 达到分离目的。

柱层析原理及影响因素

柱层析总的原理,就是让目标蛋白结合在层析填料(树脂)上,然后通过特定的缓冲液将其洗脱下来,以达到纯化的效果。具体几种分类稍微归纳了下给你参考

免疫亲和层析

原理:亲和色谱分离蛋白以一个蛋白与特异性配基配对到色谱基质上,且蛋白质与配基间具有可逆的相互作用作为基础。目标蛋白与配基之间的生物学相互作用,可以是由于静电学的相互作用或是分子间疏水的相互作用,也可以是范德华力或氢键结合力产生的。

影响因素:主要是亲和标签的完整程度,缓冲液的组分。

离子交换层析

原理:离子交换对分子的分离是基于它们表面净电荷的差异。以蛋白质为例,它由许多包含弱酸弱碱集团的不同氨基酸组成。它们表面的净电荷会随着周围环境的pH值改变而改变。对某一特定蛋白质来说,其表面净电荷与pH之间的相对关系是独特的,而离子交换层析正是利用了这一特点来完成对不同蛋白质的分离。

影响因素:主要是缓冲液的pH值,盐浓度。

疏水相互作用层析

原理:疏水层析根据蛋白表面疏水性的不同,利用蛋白质与疏水层析介质疏表面可逆的相互作用来分离蛋白。纯水状态下,任何疏水作用都太弱而不能导致配基与蛋白之间的相互作用。某些盐却可以增强疏水相互作用。高浓度的盐会增强相互作用,而低浓度的盐会降低相互作用。但是目前尚无被广泛接受的关于疏水相互作用层析机制的理论。

影响因素:环境温度,盐浓度。

凝胶过滤层析

凝胶过滤根据分子通过凝胶填料大小不同对其进行分离。以蛋白质为例,因为分子不与凝胶填料结合,故缓冲液成分不会直接影响分辨率。

影响因素:蛋白质分子量。